RIPA裂解液(組織/細胞)

【產品規(guī)格】 ：20ml /100ml

【儲存條件】 ：RIPA裂解液4℃保存，PMSF -20℃保存

【有效期】 ：12個月

【產品簡介】 ：

RIPA裂解液是一種主要用于從動物組織和動物細胞中抽取的可溶性蛋白的試劑。

RIPA 組織/細胞裂解液是利用表面活性劑等來裂解細胞膜（包括核膜）。本試劑提取的蛋白為可溶性總蛋白。

本產品僅供科研實驗用，不做其它用途！

【使用說明】 ：

如發(fā)現(xiàn)RIPA有沉淀，請放室溫半小時或者常溫水浴使沉淀溶解。

根據(jù)使用量，取每1mL RIPA加入10uL PMSF，使PMSF的最終濃度為1mM，混勻備用（PMSF現(xiàn)用現(xiàn)加）。

1、樣品前處理：

a)對于貼壁細胞：去除培養(yǎng)液，用PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍。按照6孔板每孔細胞量加入150-250 μL裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數(shù)下，使裂解液和細胞充分接觸。

b)對于懸浮細胞：離心收集細胞，按照6孔板每孔細胞量加入150-250uL裂解液的比例加入裂解液，用手指輕彈懸浮細胞以充分裂解。充分裂解后應沒有明顯的細胞沉淀。如果細胞量較多，必需分裝成50-100萬細胞/管，然后再裂解。

c)對于組織樣品：把組織剪切成細小的碎片。按照每20mg組織加入150-250 μL裂解液的比例加入裂解液(如果裂解不充分可以適當添加更多的裂解液，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當減少裂解液的用量) 。用玻璃勻漿器勻漿，直至充分裂解。

2、后處理：

將裂解后的樣品10000-14000g離心3-5分鐘，取上清，即可進行后續(xù)的蛋白濃度測定、SDS-PAGE、Western blotting和免疫沉淀等操作。

【注意事項】 ：

本試劑為強烈型裂解液，可以提取核蛋白，但在提取核蛋白的同時，也會將基因組一并釋放出來，若細胞量多會造成細胞裂解液粘稠：此時可以直接加入蛋白上樣緩沖液，煮沸再離心，離心后直接上樣電泳；若想測定濃度，可加入少量 SDS（1%），煮沸后離心測濃度。本系列蛋白提取試劑所提取的蛋白由于含有去污劑，所以不適合使用Bradford 蛋白濃度測定試劑盒，請選擇BCA法或者Lowry法檢測蛋白濃度。

如果需要檢測和基因組結合特別緊密的蛋白，則可以通過超聲處理打碎打散粘稠狀物，隨后離心取上清用于后續(xù)實驗。

RIPA裂解液(組織/細胞)